会泽县阿力甜
最近，Keisuke Ito等发现组氨酸-30残基对奇异果素的味道修饰作用起重要 作用。他们猜测，奇异果素在酸性条件下的味道修饰作用是因质子化作用而引起 的构象变化而产生的，质子化作用的对象是组氨酸-30和/或组氨酸-60。
图5-21 MCL的三维分子模型 Cy8*Hi?残基都以棍状阁表示。在图中，C表示CyB，H表示HU。
阁5-23野生型Brazzdn的带状图
果素。首先，导入重组奇异果素基因，构建重组奇异果素的表达质粒，并在表达 质粒中插人KEX2切割位点；然后，将表达质粒导人如orrzoe，获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养，培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示， 在非还原条件下，60ku处有一条宽带，301O1处仅有一条校糊的带；而在还原条 件下，60ku处的带消失，30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基，纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基，所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明，这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
(CH,),N ? SO, + C6HnNH, 60 ~7°^ >C6HnNHSOjH ? N (CH,〉3 C6HnNHS03H ? N (CHj), +NaOH ~?QH,,NHS03Na + (CH3),N + H20
(二）苯酐法
许多甜菊苷生产流程均在后道的精制过程中使用f有机溶剂，诸如要去 除一些杂质可选用正丁醇及其醚或酯，有机氣化物或脂肪醇等。要使甜菊苷 结晶析出可选用甲醇或乙醇。结晶甜菊双糖苷A的较好溶剂为70%乙醉。 色谱分离可用多孔性凝胶或有机溶剂。要用色谱法分离出各种单一的双萜苷 可用烷基醇作溶剂。虽然色谱法精制分离效果很好，但还难于在商业化生产 中加以应用，在甜菊苷沉淀过程中，通常结合使用一些有机溶剂以去除色素 及一些杂质，最常见的沉淀剂是氢氣化钙。使用絮凝剂也可去除类似的 杂质。
四、甜菊双糖伴的安全毒理学分析